1.1 光源

　　在很多舊的顯微鏡書(shū)上所提到在理想的照明光源外有一層白色的遮蔽保護(hù)，而現(xiàn)在所使用的為電子照明。如果沒(méi)有完整的照明系統(tǒng)內(nèi)建在顯微鏡里，光源通常為一個(gè)電網(wǎng)電壓玻璃電子燈泡裝置在一個(gè)簡(jiǎn)單的外罩里，跟顯微鏡的鏡子一起使用。這一類(lèi)型的照明并不完全適合在高功率下所使用，因?yàn)檫@一型的照明很大臺(tái)、會(huì)制造大量的熱而且只有很低的照明。如果有外部照明使用，外罩就不需要一塊收集鏡但是光源必需裝設(shè)一個(gè)合適的虹膜光圈或是有不同大小的金屬光圈設(shè)備。當(dāng)顯微鏡使用光源集中模式時(shí)，將有適合的場(chǎng)光圈和控制照明的大小。如果有一個(gè)可聚焦收集鏡安裝在外部燈泡，將可以使用科勒照明。一些比較便宜的顯微鏡裝有低功率、低瓦數(shù)燈泡，燈泡里頭的燈絲設(shè)計(jì)的較平，將線圈緊密的纏繞在一起而且面對(duì)燈泡的玻璃覆蓋的末端。這些是提供光來(lái)源的延伸。使用這一類(lèi)型燈泡的顯微鏡有一片簡(jiǎn)單的收集鏡，通常還有一片放在底面的毛玻璃來(lái)提供光的散射。雖然光燈泡是放置在顯微鏡的基座，照明設(shè)備可預(yù)先校準(zhǔn)且顯微鏡在光源集中模式下可使用。很多實(shí)驗(yàn)用的顯微鏡有相同的類(lèi)型的低電壓燈泡，放置在前中心平臺(tái)，此平臺(tái)可以隨著我們所需要去移動(dòng)，制造出我們所想要的光源。

　　2.1燈絲的分類(lèi)

　　鎢絲燈泡的動(dòng)力來(lái)源主要是經(jīng)由電壓控制變壓器。燈泡發(fā)散出連續(xù)的光譜，從300到1500nm，大部份的能量輸出都在長(zhǎng)波長(zhǎng)的范圍里。這表示光有相對(duì)低的色溫。當(dāng)照射器的電壓上升，照射器的發(fā)光及色溫也一起很明顯的增加。光源的色溫在色彩顯微照相術(shù)里很重要，他的單位為K。

　　傳統(tǒng)燈泡的缺點(diǎn)就是他的輸出會(huì)隨著使用的時(shí)間而衰減，像鎢會(huì)從燈絲上蒸發(fā)然后冷卻凝結(jié)在燈泡玻璃內(nèi)側(cè)使得玻璃變黑。

　　現(xiàn)在很多顯微鏡都裝設(shè)鹵素?zé)襞�，跟傳統(tǒng)的鎢絲燈泡相比，當(dāng)操作在相同的電壓下，鹵素?zé)襞萦泻艽蟮牧炼取⒑芨叩纳珳�。一些鹵素?zé)襞蓦m然很小，但是在12伏特之下可輸出100瓦的功率。以鹵素?zé)襞輥?lái)說(shuō)，在硅玻璃外罩下的燈絲非常靠近，這樣可以產(chǎn)生很高的燈絲溫度，所以一般的玻璃無(wú)法承受這樣的溫度。鹵素?zé)襞莸母邿艚z溫度可以產(chǎn)生很高的照明。鹵素?zé)襞萘硪环N的特征就是硅玻璃不會(huì)隨著使用的時(shí)間而變黑。這一類(lèi)型的燈泡即使長(zhǎng)時(shí)間使用，光的輸出很明顯的不會(huì)改變，然而色溫卻會(huì)隨著燈泡使用的時(shí)間會(huì)有一些減少。鹵素?zé)襞菀粯影l(fā)射出連續(xù)頻譜，當(dāng)操作在相關(guān)的電壓下，色溫的范圍大約是在3200-3250K。由此可裀鹵素?zé)襞菀恢倍荚诟邷叵虏僮鳎�所以在光路徑必需裝有一片濾熱鏡，而且鹵素?zé)襞菀�安裝在通風(fēng)良好的燈屋里。

　　當(dāng)聚光鏡將明場(chǎng)圖像聚在樣品面上，在工作臺(tái)下方的聚光鏡嵌合口，必須用一些方法將顯微鏡的光軸導(dǎo)向中央，幾乎所有的聚光鏡都有光圈在焦平面或靠近焦平面的地方，這種光圈是照光孔徑光圈(光圈孔徑是適合短工作距離的)，它還限制了NA值，透過(guò)聚光鏡，使圓錐光線不致于發(fā)散而且適合物鏡的孔徑，在舊的儀器上通常會(huì)提供彩色濾光片的嵌合口，以提高對(duì)比值，或色彩溫度校正。

　　1.3 聚光型式

　　雙鏡片照明器的聚光鏡較常使用在便宜的顯微鏡，由Ernst Abbe設(shè)計(jì)，在圖6.2a有展示出，這種聚光鏡對(duì)于色彩和球面像差沒(méi)有修正，所以不適合用高質(zhì)量的顯微鏡，Abbe聚光鏡在光圈全開(kāi)的時(shí)候產(chǎn)生圓錐型的光線，所以不會(huì)產(chǎn)生敏銳的聚焦(因?yàn)榍蛎嫦癫畹年P(guān)系)，而是產(chǎn)生一個(gè)多重焦點(diǎn)的混亂區(qū)域(顯示在圖1.13)，這代表由Abbe聚光鏡所產(chǎn)生的影像不是那么的清析，而且在周?chē)�有彩色的光環(huán)(因?yàn)榇朔N聚光鏡缺少色彩調(diào)校)，一個(gè)典型的Abbe雙鏡片照明器，利用’dry’，有最大的孔徑約0.5，Abbe最主要的好處是便宜和有很長(zhǎng)的工作距離，而且有能力在物體上照亮很大的范圍。

　　能得到高校正的聚光鏡是比較好的結(jié)果，三鏡片Abbe聚光鏡或等光程聚光鏡，有比一般Abbe聚光鏡好的球面像差校正，不過(guò)仍然對(duì)色差沒(méi)有改善，有一種’dry’NA值為0.65的油涂在載玻片底下，當(dāng)它的孔徑值達(dá)到1.2的時(shí)候，不管色差，這類(lèi)型的的聚光鏡常用在一般的顯微鏡上，最貴的無(wú)色差/等光程聚光鏡(圖6.2c)在最少兩個(gè)波長(zhǎng)下適當(dāng)?shù)娜旧�，�?dāng)載玻片涂上油，聚光鏡可以提供圓錐狀的等光程光線，其N(xiāo)A值約為1.4，某些聚光鏡為了獲得最高的解析，使用高數(shù)值孔徑且復(fù)消色差的浸油型物鏡。

　　1.4 光源聚焦

　　控制樣品的照明是基本的工作，操控光源照明確�？傻玫竭m宜觀測(cè)結(jié)果，這些控制包含有樣品的照明及限制樣品中所需照明的區(qū)域，使光源照只射于樣品某區(qū)域中使其可見(jiàn)是一個(gè)很好的練習(xí)，這可減少因散射強(qiáng)光降低圖像對(duì)比。

　　這幾年中，安排照明器及聚光鏡方式已滿足目前的需求，這老式方法稱(chēng)為”光源聚焦”的照明，在近幾個(gè)世紀(jì)中已使用燃燒的油燈來(lái)達(dá)到光源聚焦的目的。現(xiàn)今，光源聚焦的照明方式仍廣泛的使用于廉價(jià)的學(xué)生顯微鏡及利用額外的照明設(shè)備觀測(cè)的業(yè)余使用者，像opal enlarger 燈泡這樣的均勻光源，直接經(jīng)由聚焦鏡將光源聚于樣品面上，而樣品中被照明的區(qū)域是由位于照明器前方的照明光圈所控制的，一系列的共扼面將使得照明器表面、場(chǎng)光圈及樣品聚焦于同一處，致使以上的影像將呈現(xiàn)于視網(wǎng)膜，為了改善這樣的情況，照明的設(shè)備必需足夠大、無(wú)明顯的結(jié)構(gòu)外型及在照明器表面具有均勻的光強(qiáng)度，當(dāng)額外的照射光源必需使用時(shí)，光源聚焦的照明方式將適合于平�？梢�(jiàn)的顯微鏡系統(tǒng)，這樣的設(shè)置是即簡(jiǎn)單又容易。

　　大多數(shù)近代的顯微鏡都使用低電壓白熾燈或是鎢絲鹵素?zé)糇鳛檎彰髟O(shè)備，由于鎢絲照明器具有顯著的結(jié)構(gòu)，這使得無(wú)法用于光源聚焦的模式;然而，起初用于顯微照相術(shù)由August Kolher所發(fā)明的技術(shù)卻可用來(lái)取代，這是一種將鎢絲燈置于集光鏡后方之焦距處，而場(chǎng)發(fā)光光圈掛載于集光鏡前方，如此一來(lái)顯微聚光鏡可將場(chǎng)發(fā)光光圈處之影像聚焦于待測(cè)樣品平面上，然而集光鏡只將鎢絲照明器影像投射于聚光鏡前的焦平面上(也就是光圈虹膜所在位置)，因此照明器的影像將只會(huì)出現(xiàn)”光圈圖表”的共扼面上，也就表示我們將不會(huì)再看到燈絲影像了。在這樣的設(shè)置中，照明設(shè)置中的集光鏡如同照射在樣品平面上均勻的第二照射光源，這么一來(lái)似乎具備了可調(diào)整光源大小的均勻照明器;場(chǎng)光圈及樣品的影像將會(huì)接替出現(xiàn)于”場(chǎng)圖表”中的共扼面上，我們稱(chēng)為主要影像平面，并且會(huì)成像于視網(wǎng)膜上。

　　對(duì)(Kölher)科勒照明而言，照明燈箱必需符合集光鏡，通常包含了非球狀的組件，這樣的集光鏡系統(tǒng)必需能具足夠的擴(kuò)大投射白絲燈影像，使得聚光鏡的最大工作光圈充滿了光源，在Kölher系統(tǒng)中光圈是符合集光透鏡的，并作用為場(chǎng)照明光圈，這個(gè)動(dòng)作，第一是為修改物體所受照明區(qū)域的直徑，由于樣品受光學(xué)場(chǎng)以外的光影響導(dǎo)致散射光進(jìn)入物鏡中，并且自主要影像周?chē)�所造成的光在鏡管中散射至目鏡，除非我們將場(chǎng)照明光圈影像限制在合適的觀測(cè)大小范圍;第二，當(dāng)將光圈部份關(guān)閉時(shí)，這可使得聚光鏡完成聚焦動(dòng)作，并且確認(rèn)聚光鏡置于中心處，當(dāng)聚光鏡聚好焦時(shí)，場(chǎng)光圈影像亦同時(shí)清楚地顯示，如樣品影像清晰的位于觀測(cè)中心。

　　1.5表面照明

　　假如樣品太厚導(dǎo)致光線透不過(guò)去，如光澤的金屬塊，或它們的顏色非常深，然后必須用入射光檢查其表面，我們通常稱(chēng)表面照明，最簡(jiǎn)單的型式，用一兩個(gè)低能量的點(diǎn)照明燈座，在顯微鏡工作臺(tái)上方傾斜一個(gè)角度，或使用自然光傾一個(gè)角度打在樣品上，高能量的復(fù)合式顯微鏡對(duì)于光的要求必須更為嚴(yán)格，這樣才能獲得更佳的數(shù)據(jù)，有表面照明的顯微鏡，當(dāng)光由適當(dāng)?shù)慕嵌壬淙牍茏觾?nèi)的光軸，然后經(jīng)由物鏡里半穿透半反射且與光成45度的鏡片反射到樣品上，在一些較古老的顯微鏡，可以用簡(jiǎn)單的方法達(dá)到此目的，這種顯微鏡包含一片很薄的玻璃片，通常這種玻璃類(lèi)似很小的圓蓋玻片，然后在其上部份鍍銀，另一種不同的方法是使用較小且在背面有焦平面的棱鏡，當(dāng)入射光打到樣品上時(shí)會(huì)有一個(gè)小小的斜向角度，以致于物鏡的數(shù)值孔徑會(huì)減小，現(xiàn)代的系統(tǒng)使用狹縫光束盒，而且允許全彩的Kohler光來(lái)射在樣品上，如上面所說(shuō)的傳送光，表面照明也可使用斜向光來(lái)應(yīng)用在明場(chǎng)和黑暗的環(huán)境。

　　現(xiàn)代的反射光照明設(shè)備接替鏡是一個(gè)包含了一系列的光學(xué)照明系統(tǒng)，這個(gè)用燈絲投射影像到光圈孔徑平面，這兩個(gè)的圖像靠鏡片L2投射到物鏡后方的焦平面，這就是傳送光系統(tǒng)里的光線收集鏡片，我們可以透過(guò)開(kāi)關(guān)光圈孔徑來(lái)控制光通過(guò)的量，且不會(huì)影響到物鏡里鏡片的孔鏡，同時(shí)也顧及到從樣品打回來(lái)的光，如果光圈孔徑完全放在物鏡后方的焦平面，這個(gè)獨(dú)立的校正是不可能的。

　　許多應(yīng)用在生物上的顯微鏡包括了營(yíng)光顯微鏡和共焦顯微鏡，這兩者通常配有表面照明設(shè)備，而且發(fā)射的光通常都是低強(qiáng)度的且往往都有最大的解析，這種顯微術(shù)也可用于低反射的物質(zhì)如煤，這些全部需要物鏡片最大的開(kāi)口值，這個(gè)照明場(chǎng)的光圈嵌在里面，所以物鏡投射它的影像到樣本上，為了減少低反射樣品上的輝度，控制好照明場(chǎng)的在表面照明范圍的大小比輸送光來(lái)的重要，值得注意的是，Kohler反射光系統(tǒng)，在相對(duì)位置和光圈孔徑都與光源相反，光圈孔徑開(kāi)始接近光，因?yàn)樗�不是形容物鏡后方焦平面的光圈位置(這樣會(huì)限制圖形的孔徑)，光圈被放置在預(yù)定的共厄面。

　　2 練習(xí)使用顯微鏡

　　2.1 得到好的影像

　　如果不幸使用質(zhì)量較差的顯微鏡，它提供的影像不是我們想要的，正確的架好儀器是非常簡(jiǎn)單的，而且有能力提供好的影像，如果按照某種簡(jiǎn)單的規(guī)則去調(diào)雷射，只需要很短的時(shí)間就可以獲得高質(zhì)量的影像，詳細(xì)研究顯鏡的樣本會(huì)花很多時(shí)間，這是一個(gè)很好的想法，在開(kāi)始研究之前，我們要先確定椅子夠高可以讓我們舒服的觀看顯微鏡的目鏡，而不需伸長(zhǎng)脖子或彎腰，我們可以安置我們的手在工作臺(tái)上，這可以讓我們輕易移動(dòng)顯微鏡臺(tái)也可以容易對(duì)焦。

　　顯微鏡有許多控扭在使用，要在一本書(shū)里詳細(xì)介紹每個(gè)操作指令是不可能的，使用者應(yīng)該咨詢其它顯微鏡的操作手冊(cè)以了解某操作的特定用法，下面的操作指令提供讀者一個(gè)廣義的概要和使用傳送光和Kohler光基本的典型顯微鏡架設(shè)方法。

　　(1) 放置一個(gè)高對(duì)比的染色樣品在工作臺(tái)上，調(diào)整顯微鏡直到物鏡10x或16x的位置上而且打開(kāi)光，打開(kāi)所有的光圈，且將聚光鏡提升到最高。

　　(2) 假如顯微鏡是雙眼式的，檢查目鏡管間的雙眼距離，必要時(shí)需要重新調(diào)整。

　　(3) 粗糙的調(diào)整聚焦在樣本上，這是非常好的做法讓第一次物鏡在載玻片上5mm處，從工作臺(tái)的來(lái)看。從目鏡看過(guò)去，增加物鏡與樣品間的距離直到影像清析為止，做最校正以達(dá)到顯微鏡最好的聚焦。

　　(4) 假如你在使用雙眼式顯微鏡，你必須調(diào)整自己適合的目鏡模式，最后，目鏡必須有自己的校正環(huán)，閉上一只眼睛來(lái)調(diào)整目鏡，用另一只眼睛來(lái)對(duì)焦以取得最佳的影像，再將兩只眼睛角色互換，重復(fù)上述步驟。

　　(5) 檢查光圈孔徑是否夠?qū)�，部份地靠近光�?chǎng)直到圖像呈現(xiàn)在視野里(有時(shí)候在中間圖像是模糊的)。

　　(6) 調(diào)整聚光鏡的聚焦使圖像和光場(chǎng)光圈合適，如果是Abbe聚光鏡，這很有可能使圖形帶有色彩，不可避免的，等光程和無(wú)色差的聚光可以提供影像和光圈場(chǎng)更合適。

　　(7) 如果需要，將圖像擺在光圈光場(chǎng)中央，這可以很簡(jiǎn)單的在視野里讓圖像倍率和光圈場(chǎng)相符合，在大多數(shù)的照明系統(tǒng)設(shè)備上包括光圈，在制造的時(shí)候就已經(jīng)用聚光鏡中央的旋扭將圖形場(chǎng)調(diào)到中間，在某些情況下須用自己的旋扭來(lái)校正。

　　(8) 打開(kāi)照明場(chǎng)光圈直到整個(gè)視野都照亮為止。

　　(9) 移開(kāi)其中一個(gè)目鏡，然后注視物鏡后方的焦平面，假如放大鏡提供相位對(duì)比，對(duì)于看清楚焦平面是非常有用的，關(guān)掉聚光鏡的照明孔徑直到圖像超出焦平面的光場(chǎng)。

　　(10) 把物鏡放回原處，用亮度調(diào)整扭調(diào)整光的亮度到舒服的程度或在光徑加入自然濾片。

　　現(xiàn)在顯微鏡可以提供它能力范圍內(nèi)最好的圖像，假如物鏡沒(méi)有調(diào)整的很好，必須關(guān)上燈光，重新調(diào)整，這比獲得良好的影像來(lái)的重要，對(duì)于舊的鏡片，甚至用其它倍率來(lái)減少物鏡的工作孔徑，只有實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)才是這個(gè)情況最好的響導(dǎo)。

　　2.2 較高倍率物境：

　　低倍物鏡與高倍物鏡最大的不同是后者具較高數(shù)值孔徑及較大解析，亦指當(dāng)由較小倍率換至較大倍率時(shí)，需將光圈打開(kāi)已得到較大之光錐角并得到足夠的解析。每個(gè)物鏡應(yīng)操作在光錐角為數(shù)值孔鏡的70-90%，否則會(huì)使影像不清及出現(xiàn)光暈。調(diào)回低倍物鏡時(shí)亦須重新校正，否則會(huì)造成炫光而降低對(duì)比。

　　2.3 運(yùn)用極低倍物鏡：

　　應(yīng)該盡量于低倍率下觀測(cè)，如此較能使得觀測(cè)者能連結(jié)該影像至肉眼及放大鏡影像，只有當(dāng)所有信息揭取得后方能換至較大倍率物鏡，初學(xué)者大都很快及運(yùn)用高倍物鏡而導(dǎo)致無(wú)法了解物體結(jié)構(gòu)，當(dāng)用低倍物鏡時(shí)通常聚光鏡無(wú)法照亮整個(gè)結(jié)構(gòu)，所以必須使用特殊適合的聚光鏡。

　　2.4 油鏡：

　　用于結(jié)構(gòu)大小約等于物鏡分辨率時(shí)必須使用數(shù)值孔徑大于1的油鏡，步驟如下：

　　1. 先使用低倍物鏡，將物體至于中央。

　　2. 先滴一滴油至蓋玻片，若使用近焦物鏡，緩慢移動(dòng)物鏡接觸油。

　　3. 調(diào)整焦距至影像清晰。

　　4. 確認(rèn)聚光鏡的光圈是打開(kāi)的，此時(shí)聚光鏡的最大使用數(shù)值孔徑是1.0，故光錐角是絕對(duì)不夠的，需使用特別的高數(shù)值孔徑聚光鏡。

　　最好的結(jié)果是只有要觀測(cè)樣本的部分需要被照明，當(dāng)倍率增加時(shí)，照明的范圍亦須減小，否則炫光會(huì)影響影像，特別是反射式。另一種影響影像的是泡泡，當(dāng)目鏡移去時(shí)可看到，可利用前后移動(dòng)或旋轉(zhuǎn)玻片去除泡泡的影響，當(dāng)如此都無(wú)法去除時(shí)就要重滴一滴油。

　　2.5 暗視野：

　　暗視野是用來(lái)增加對(duì)比的很有價(jià)值的技術(shù)，而且簡(jiǎn)單。此處提及暗視野基于其簡(jiǎn)單且常受顯微學(xué)家的重視。在低倍率時(shí)通常在阿貝聚光鏡中央置一不透明之黑點(diǎn)，在高倍率時(shí)則需要特別之暗視野聚光鏡，且須于下方與玻片的油接觸，且須特別對(duì)準(zhǔn)中心，一些暗視野聚光鏡中央有一圓圈以幫助定位。先移去玻片，將該黑點(diǎn)或圓圈對(duì)于視野內(nèi)，換上玻騙且將聚光鏡接觸玻片下方，最后調(diào)整聚光鏡的焦距直到見(jiàn)到最佳的暗視野影響，即物體明顯顯示于黑的背景下。在缺乏暗視野聚光鏡的時(shí)候可將滴倍率物鏡對(duì)焦于玻片，接著將聚光鏡對(duì)準(zhǔn)該點(diǎn)，調(diào)整聚焦點(diǎn)為一視野內(nèi)的亮點(diǎn)，接著換上高倍率物鏡作最后調(diào)整，注意當(dāng)使用阿貝聚光鏡時(shí)需將光圈全打開(kāi)以使周?chē)�的光皆能通過(guò)，反射式暗視野并不適用光圈。

　　當(dāng)使用暗市也技術(shù)時(shí)須注意所有光學(xué)路徑必須維持干凈，任何額外的物質(zhì)會(huì)明顯影響影像。

　　2.6 反射鏡或上照明：

　　當(dāng)物體為不透明時(shí)需用反射式，使用低倍顯微鏡及一般配件即可，因低倍物鏡工作距離較�？梢怨恻c(diǎn)在樣本上對(duì)焦，這樣的照明可能會(huì)偏離光軸但可提供較佳的輪廓，當(dāng)需要用到較高倍率物鏡時(shí)便需用到柯勒照明，炫光通常會(huì)較穿透式嚴(yán)重故需小心調(diào)整，反射鏡安裝于后共焦面，在一些簡(jiǎn)單的裝置上反光鏡可能只是簡(jiǎn)單的玻璃，有十一個(gè)小的鏡片會(huì)裝于光軸上但會(huì)限制最大光圈，現(xiàn)代的設(shè)備會(huì)基于柯勒原理而使用一分光管或內(nèi)建的光學(xué)照明系列。

　　2.7 調(diào)整燈：

　　當(dāng)使用柯勒照明時(shí)燈式必須有一收集片，必須小心調(diào)整燈絲影像于聚光鏡的光圈，此時(shí)需暫時(shí)關(guān)上聚光鏡光圈。在一些內(nèi)建光源的顯微鏡可調(diào)整燈泡于光軸，如果沒(méi)有在燈泡后有鏡子及磨沙玻璃于集光鏡，可藉由放一磨沙玻璃或白卡至聚光鏡焦距上則可看到燈絲，該平面可輕易于聚光鏡處以一鏡子擺為45度時(shí)看見(jiàn)。

　　如果使用顯微鏡次座臺(tái)鏡作為外部光源之柯勒照明，燈絲的影像必須聚焦于聚光鏡光圈下方的燈室聚光鏡，利用一個(gè)小型的手持配鏡即可輕易看見(jiàn)。

　　2.8 設(shè)定來(lái)源聚焦光源

　　此方法通常用于顯微鏡裝有鏡子及外部光源，燈泡應(yīng)裝于具有限制燈泡面積的燈室，他可能是可具有可調(diào)之光圈組，且此光圈組需盡量靠近燈泡，燈泡本身則必須光線充足及均勻，并足以照明低倍率時(shí)的整個(gè)視野。一般所謂的珍珠燈泡則不適合，應(yīng)他會(huì)在視野中央形成 一亮點(diǎn)，用于放大相片用的乳白燈泡則非常適用。顯微鏡的設(shè)定步驟如下：

　　1. 調(diào)整燈泡和顯微鏡，將燈泡至于距離顯微鏡200-250mm，調(diào)整燈室角度并將光圈開(kāi)至最大。

　　2. 放一適當(dāng)?shù)臉悠分劣^測(cè)臺(tái)，并使用10倍物鏡，通常此時(shí)不論光源是否有調(diào)整好，都應(yīng)該有足夠的光。

　　3. 調(diào)整顯微鏡的鏡子及燈泡至最佳亮度

　　4. 緩慢移動(dòng)鏡子，會(huì)看見(jiàn)模糊的視野邊緣，接著調(diào)整聚光鏡直至邊緣影像清晰，因?yàn)榈湫偷陌⒇惥酃忡R的消色差能力不佳，有可能會(huì)見(jiàn)到光暈，如果場(chǎng)光圈不適當(dāng)則可能要調(diào)整燈泡聚焦至樣本平面，一筆尖放置燈泡表面可幫助對(duì)焦。

　　5. 減小光圈至光源指照亮樣本。

　　6. 調(diào)整聚光鏡下的光犬以取得適當(dāng)工作光圈。

　　7. 如果必要可跳整鏡面角度，使用強(qiáng)度率光鏡及彩色率光鏡。

　　2.9提高對(duì)比

　　雖我們已經(jīng)強(qiáng)調(diào)過(guò)了一個(gè)影像的處里是否能夠清楚取決于有沒(méi)有足夠的對(duì)比是很重要的所以在這一章節(jié)我們將介紹對(duì)比對(duì)于光學(xué)顯微技術(shù)是很重要的就像darkground,phase contrast ,differential interference contrast ,等技術(shù)都是為了提高對(duì)比而發(fā)展出來(lái)的技術(shù)詳細(xì)的說(shuō)明在Bradbury Evennett(1996)有詳細(xì)說(shuō)明若我們有一個(gè)對(duì)比不高的樣品我們要用簡(jiǎn)單的方法來(lái)提高對(duì)比若我們有一個(gè)物鏡他有自然的顏色或有被染色過(guò)就可以用濾鏡來(lái)加強(qiáng)對(duì)比若有一張黑白照片我們一用濾鏡去補(bǔ)償?shù)脑捑涂梢蕴岣邔?duì)比又如一樣品我們把他染紅綠色在經(jīng)過(guò)綠濾鏡補(bǔ)償之后紅色部分就會(huì)變的很暗反之原理亦相同寬帶的時(shí)域穿透率竟是用玻璃或塑料做成的其它重要的濾鏡如color correction filter,neutral filter,heat fitter color correction filter用來(lái)抑制鎢燈所產(chǎn)生的紅黃的過(guò)剩光線light blue filter有時(shí)可利用他來(lái)用肉眼去看會(huì)更清楚nd filter是用來(lái)衰減強(qiáng)度的若必須要用高功率的光源這一個(gè)濾鏡就是最常用的率降來(lái)衰減強(qiáng)度用的千萬(wàn)不要只靠著關(guān)閉孔鏡或改降低光員工率若高強(qiáng)度的燈如鎢鹵素?zé)魟t熱濾鏡就會(huì)被用到他可以用來(lái)吸收由樣品所生的紅外放射光

　　2.10

　　當(dāng)有一個(gè)影像差的情形出現(xiàn)時(shí)照著7.2來(lái)操作就可以改善

　　2.11儀器的注意

　　再顯微鏡的儀器通常是貴重的所以再舉起時(shí)均要小心并且保持儀器在最好的狀態(tài)如何保護(hù)儀器通常預(yù)防好于治療千萬(wàn)不可以用不是當(dāng)?shù)穆萁z起子再移動(dòng)物鏡或目鏡時(shí)均要注意是否會(huì)撞到平臺(tái)或其它東西。